在虚拟应用程序中遇到此问题。所有权限都设置好了。 IIS_IUSRS, AppPoolIdentity，然后给Everyone完全的访问权。毫无效果。重新启动了应用程序，站点和IIS，但是不行。

删除虚拟应用程序并重新添加它，然后它开始工作。

真希望我知道是什么解决了这个问题。

我通过为应用程序池用户(WIN SERVER 2008 R2)添加读权限来解决这个问题: C:\Windows\System32\inetsrv\config

一点背景知识: 我们的服务器被黑客使用经典的错误，应用程序用户有更多的权限，它应该(本地管理)。

为了解决这个问题，我们创建了一个新的域用户，它只对应用程序文件夹有权限，并将其分配为应用程序池用户。然后我们遇到了问题，这是我们问题的解决方案。

当IIS应用程序有一个物理路径包含正斜杠/而不是反斜杠\的虚拟目录时，我们就遇到了这种情况。这是在我们的持续交付过程中使用IIS的powershell管理API意外完成的。

错误配置示例- applicationHost.config . Config

<application path="/MySite/MyService" applicationPool="MyAppPool" enabledProtocols="http">
    <virtualDirectory path="/" physicalPath="C:\inetpub\MySite/MyService" />
</application>

确保physicalPath属性不包含正斜杠/，只包含反斜杠\

- applicationHost.config . Config

<application path="/MySite/MyService" applicationPool="MyAppPool" enabledProtocols="http">
    <virtualDirectory path="/" physicalPath="C:\inetpub\MySite\MyService" />
</application>

我在Windows 10上使用microsoftaccount\email@contosa.com帐户运行应用程序池时遇到了这个问题(例如，用Microsoft帐户而不是本地帐户登录PC)。

显然在我的电脑上有些东西损坏了;删除IIS并重新添加它没有任何作用(因为IIS元数据库似乎没有被删除)。删除和重新创建应用程序池也无济于事。

我的解决方案是创建一个新的应用程序池，使用相同的设置，但名称不同。这为我解决了问题;显然，有些东西已经损坏了与appool，即使删除它，重新添加它与相同的名称不会修复。

检查文件是否被标记为只读，不管是否有IIS_IUSRS权限，它都会显示相同的消息。

有时如果它是一个新的服务器，你需要配置或安装ASP。IIS上的NET特性，使它能够读取您的web。配置文件。

对我来说，这就是原因。